還記得5月那臺被日本宇宙航空研究開發(fā)機構(gòu)(JAXA)送入太空的徠卡顯微鏡嗎?
圖1 JAXA發(fā)布了該新聞(新聞來源:JAXA)
JAXA近公開了這次太空旅行的DMi8顯微系統(tǒng)配置細節(jié)。到達空間站后,科學家們利用這臺顯微系統(tǒng)開始了他們的測試之旅,那么他們又做了哪些研究呢?
DMi8抵達空間站并開展活細胞觀察
近年來,生物機體的重力感應機制研究和用于再生醫(yī)學的高功能器官培養(yǎng)技術(shù)已成為重要的研究課題,其中活細胞活體的三維觀察是一個至關(guān)重要的研究方向。
JAXA選擇了徠卡DMi8電動倒置顯微鏡作為系統(tǒng)平臺,并將DMi8安裝在空間站日本實驗倉“KIBO”中,由“KOUNOTORI” H-II運載火箭運送,該運載火箭已于5月26日到達空間站;并且完成了一定階段的生命科學實驗。
為了滿足太空作業(yè)的要求,以及進行活細胞三維觀察的目的,以DMi8為顯微平臺,經(jīng)過改造和搭配多種功能配件,整合出全新的用于生命科學實驗的實時成像系統(tǒng),命名為COSMIC。
圖2 JAXA送入太空作業(yè)的Leica DMi8結(jié)構(gòu)示意圖
該系統(tǒng)由經(jīng)過重新設(shè)計的多種組件組成,機身選擇了Leica DMi8倒置熒光顯微鏡,針對太空作業(yè)目的做了部分改造。根據(jù)實驗目的可以更換物鏡和熒光濾光片,并且操作部分(如鏡臺,物鏡轉(zhuǎn)盤,自動對焦,熒光濾鏡轉(zhuǎn)盤和聚光鏡)都是電動的。
細胞樣品附著在根據(jù)實驗制造的樣品容器支架上,并裝載在顯微鏡載物臺上?,F(xiàn)有的支架可用于微孔板,而附著的細胞可用于DCC(一次性培養(yǎng)箱)。加熱室配有兩個DCC,可以在溫度控制下進行觀察。
圖3樣品在顯微鏡載物臺上的具體放置
系統(tǒng)還配置了Nipo轉(zhuǎn)盤式共聚焦掃描頭和高靈敏度sCMOS相機,可以對熒光樣品進行高清三維成像。并配備了用于快速活細胞觀察的三個激光器,可以針對多種熒光染料進行觀察。此外,系統(tǒng)中內(nèi)置的分屏成像系統(tǒng)使一臺高靈敏度相機可以同時分屏捕獲具有不同波長的兩種熒光,并且可以對高速現(xiàn)象和FRET(熒光共振能量轉(zhuǎn)移)進行雙色同時觀察。
圖4 空間站中完成的活細胞FRET實驗,圖為紅綠雙色同時成像
此外,DMi8上的自動對焦保證了長時間觀察而不會失焦。此外,當與加熱培養(yǎng)箱結(jié)合使用時,可以保持適合培養(yǎng)的溫度環(huán)境,同時穩(wěn)定地進行長時間活細胞觀察。
圖5 以DMi8為平臺改造搭建的COSMIC系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)示意圖
太空活細胞實驗操作流程簡介
那么太空上具體是如何操作實驗的呢?地球上的科學家又是如何獲得實驗數(shù)據(jù)的呢?
是這樣的,這套實時顯微成像系統(tǒng)整體經(jīng)由面部緊固件安裝在“Kibo”機艙區(qū)域的墻壁上。將細胞樣品在細胞培養(yǎng)裝置中于若干µG~2G范圍內(nèi)的各種重力環(huán)境下進行培養(yǎng),并在顯微鏡下觀察其效果。觀察時,工作人員將樣品放在顯微鏡上,并根據(jù)地面指令遠程進行觀察。捕獲的圖像數(shù)據(jù)被暫時保存在控制PC的軌道中,并通過地面指令將其傳輸?shù)降孛妗?/span>
圖6 太空活細胞實驗流程示意圖
DMi8全電動倒置顯微鏡
l 全電動操作,智能人機交互操控,包括全電動DIC控制——智能電動化更適用于地球指令太空遠程操控;
l 徠卡高精度閉環(huán)調(diào)焦技術(shù):Z軸步進3.8nm,重復精度20nm——助力更的三維斷層掃描;
l 堅如磐石的機身鏡架,配搭自動聚焦功能和AFC自適應追焦系統(tǒng)——為活細胞提供更穩(wěn)定的焦面;
l 快速的EFW熒光切換技術(shù):濾色片21ms切換,可配置2ns高速光閘的LED激發(fā)光源——更適合捕捉活細胞的快速變化;
l 更高熒光透過的光路效率,有效降低光毒性;可作長達幾天的多位點活細胞連續(xù)成像且不影響生命活性;
l 雙無限遠擴展接口 (T-House),側(cè)面和后出口均有光口自由進入熒光光路,左右側(cè)面及上下均可接相機及其他成像設(shè)備;更強大靈活的光路,可搭建多種功能擴展模塊。
DMi8適用于:
活細胞觀察:多種反差觀察方法可選(PH,DIC,RC),靈活的功能配件可供選擇。
活細胞熒光觀察:反映特異性底物的定性,定位,定量關(guān)系。
長達幾天的多位點活細胞連續(xù)成像;多孔多位點的高內(nèi)涵活細胞成像。